近日，beat365正版唯一网站app联合新疆农业大学在卓越梯队期刊《生物技术通报》发表题为“利用CRISPR/Cas9技术构建MDH2敲除细胞株及抗呕吐毒素效应研究”研究论文。新疆农业大学动物科学学院施炜涛为论文的第一作者，beat365正版唯一网站app副研究员张晓爱和新疆农业大学副教授邵伟为论文的通讯作者。

呕吐毒素又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol ，DON），是一种广泛存在于谷物、动物饲料和食品中的真菌毒素。呕吐毒素对人和动物具有广泛的毒性效应，对具体表现为呕吐、炎症、消化道出血，甚至死亡，猪是对呕吐毒素最敏感的动物。前期我们研究发现苹果酸脱氢酶2（MDH2）是呕吐毒素产生肠道细胞毒性的候选基因之一。

我们采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MDH2稳定敲除基因的IPEC-J2单克隆细胞株，并研究敲除MDH2基因后抗呕吐毒素效应。通过荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法验证获得的细胞系为MDH2基因敲除的单克隆细胞株。CCK8细胞活力实验结果显示，与野生型细胞相比，敲除MDH2可使IPEC-J2细胞在不同浓度呕吐毒素（4、2、1和0.5 μg/mL）处理5 d时细胞活力分别极显著提高18.67%、19.59%、26.36%和27.01%。流式细胞仪实验结果显示，与野生型细胞相比，敲除MDH2使不同浓度呕吐毒素处理5 d的细胞死亡率分别极显著降低30.33%、15.81%、16.00%和14.70%。通过细胞活力和细胞死亡检测，证明该细胞株具有抗呕吐毒素毒性效应的效果，说明MDH2基因是呕吐毒素产生细胞毒性的关键响应基因，为揭示呕吐毒素诱导宿主细胞死亡的毒性机制提供借鉴，为防治呕吐毒素提供新策略。

本研究得到国家自然科学基金（31872127，32002287）和广东省农科院十四五学科团队项目（202110TD，202131TD）等项目资助。

图1  CCK8检测MDH2基因敲除对IPEC-J2细胞抗DON毒素效应的影响

图2  流式检测DON处理后IPEC-J2和MDH2-KO的细胞死亡率